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    免疫組化IHC的十大實戰經驗

    來源: 上海西格生物科技有限公司 >> 進入該公司展臺 2021/09/27 14:58:13 已瀏覽:
    導讀:免疫組化IHC的十大實戰經驗

    1. 把要做的切片先分好,做幾個抗體可分幾盒,不正常組織與正常組織要分開。其余做預實驗用。

    2. 選擇實驗要做的抗體時,要結合他們的正常組織和癌組織的分別表達率。

    3. 試劑盒的選擇可結合生物素強弱的情況。如:肝組織生物素含量高,S-P試劑盒生物素含量也高,故不能配合使用。

    4. 每次開始做時,都必須先清點實驗的必需品是否齊全。想好可能發生的意外,并先想好補救措施。當抗體不夠用的情況下,原先買的抗體*不要用完,留做可能需要的驗證試驗。新的抗體要盡量同公司,同批號。

    5. 烤片單一或綜合程度要適情況而定,可中途拿出甩一甩,盡可能先放在烤箱里烤3小時以上。切勿把片烤得太久了。程度剛好,脫蠟效果才會好。注意做好不同條件的切片標記。注意溫度穩定,再烤片。

    6. 二甲苯脫蠟。溫度過低時,可先把二甲苯整罐放進烤箱加熱,或者可把片放在二甲苯里一起加熱脫蠟,這樣效果會更好;若溫度適宜,那還是在室溫下脫蠟,要不可能會適得其反。時間也是適情況而定。

    7. 高壓修復時,要注意稀釋比例,修復液的種類  EDTA不可以重新進行利用,可能發生交叉作用,PH值等。高壓鍋內壓力未降至正常時不可打開,壓力正常后可多放會兒,能更好的利用余壓,把握程度。若是多次修復,每次都需先把鍋內熱水倒掉,換冷水,保證條件的可重復性。

    8. 抗體反復凍融可使效價降低??贵w要防止污染。不可用塑料保存,塑料可吸附抗體??贵w稀釋:應遵循“現用現配”的原則,對于PBS 其他稀釋液,注意PH值,PBS為偏中堿性 稀釋的抗體*要當天使用。稀釋比例恰好為佳,注意前帶和后帶效應。

    9. 吹干封片時不能有泡泡。若是沒封好,可進行二甲苯、酒精脫樹膠,吹干再次封片,但鏡下效果會明顯變差。因而,若沒必要,*不要再次脫膠。DAB顯色需用中性樹膠封片,AEC 易溶于有機溶劑 需用水性膠封片。

    10. 剛封完的載玻片會移動,故切片還沒干時,盡量不要碰到蓋玻片,可避免樹膠溢出,片的整體效果不好。

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